一、分居期间是否应支付抚养费

1、分居期间是必须支付抚养费的，因为抚养孩子是父母双方共同的义务，即使分居也要支付，由不直接抚养的一方支付。抚养费据子女的实际需要、父母双方的负担能力和当地的实际生活水平确定。

2、法律依据：

《中华人民共和国民法典》第一千零八十五条：离婚后，子女由一方直接抚养的，另一方应当负担部分或者全部抚养费。负担费用的多少和期限的长短，由双方协议;协议不成的，由人民法院判决。

《最高人民法院关于适用〈中华人民共和国民法典〉婚姻家庭编的解释（一）》第四十九条：子女抚育费的数额，可根据子女的实际需要、父母双方的负担能力和当地的实际生活水平确定。

有固定收入的，抚育费一般可按其月总收入的百分之二十至三十的比例给付。负担两个以上子女抚育费的，比例可适当提高，但一般不得超过月总收入的百分之五十。

无固定收入的，抚育费的数额可依据当年总收入或同行业平均收入，参照上述比例确定。有特殊情况的，可适当提高或降低上述比例。

二、离婚诉讼中能否要求分居期间抚养费

1、在分居期间，婚姻关系并未解除，夫妻一方的正常收入仍属于夫妻共同财产，所以在离婚诉讼中，主张分居期间的抚养费无明确法律依据。但在离婚后，未抚养孩子的一方应当向对方按时支付抚养费。

2、离婚后，子女由一方直接抚养的，另一方应当负担部分或者全部抚养费。负担费用的多少和期限的长短，由双方协议;协议不成的，由人民法院判决。前款规定的协议或者判决，不妨碍子女在必要时向父母任何一方提出超过协议或者判决原定数额的合理要求。