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二次入职是不能约定试用期的。同一用人单位与同一劳动者只能约定一次试用期。试用期是指包括在劳动合同期限内，用人单位对劳动者是否合格进行考核，劳动者对用人单位是否符合自己要求也进行考核的期限，这是一种双方双向选择的表现。
试用期的约定期限限制：劳动合同期限不满三个月的，不得约定试用期；三个月以上不满一年的，试用期不得超过一个月；一年以上不满三年的，试用期不得超过二个月；三年以上和无固定期限的劳动合同，试用期均不得超过六个月。
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