1、二审并不一定可以申请笔迹鉴定，在民事诉讼中，根据《最高人民法院关于民事诉讼证据的若干规定》第二十五条规定，当事人申请鉴定，应当在举证期限内提出。如果在一审中没有申请笔迹鉴定的，二审法院按此规定应不予准许。

2、笔迹鉴定是根据人的书写技能习惯特征、在书写的字迹与绘画中的反映，来鉴别书写人的专门技术。主要任务是通过笔迹的同一认定检验，证明文件物证上的笔迹是否为同一人的笔迹，证明文件物证上的笔迹是否为某嫌疑人的笔迹。笔迹鉴定不仅能检验正常笔迹，还可以检验书写条件（包括书写姿势、书写工具、衬垫物等）变化笔迹、故意伪装笔迹（包括左手笔迹、尺划笔迹）、摹仿笔迹和绘画笔迹。在同一人用同一支笔书写时，也可以用笔痕特征充实认定书写人的根据。

一、哪些笔迹鉴定请求一般会被批准？

《最高人民法院关于民事诉讼证据的若干规定》第二十七条当事人对人民法院委托的鉴定部门作出的鉴定结论有异议申请重新鉴定，提出证据证明存在下列情形之一的？人民法院应予准许？

（一）鉴定机构或者鉴定人员不具备相关的鉴定资格的；

（二）鉴定程序严重违法的；

（三）鉴定结论明显依据不足的；

（四）经过质证认定不能作为证据使用的其他情形。

对有缺陷的鉴定结论，可以通过补充鉴定、重新质证或者补充质证等方法解决的，不予重新鉴定。

当事人举证期限届满后提供的证据不是新的证据的，人民法院不予采纳。

二、申请笔迹鉴定程序有什么？

在举证期前向法院提起申请，申请方需提供鉴定的检材及对比样本（需经对方质证），双方协商选定或摇号选定鉴定机构鉴定即可。具体程序如下：

1、由一方当事人在举证期前向法院提起申请；

2、经过双方当事人质证，确定提供鉴定的样本；

3、由双方协商选定或摇号选定鉴定机构；

4、鉴定机构接收后鉴定申诉后，凭借自己专业技术及依法做出鉴定意见；

5、双方当事收到鉴定意见后对鉴定结论有异议的，还可以申请重新鉴定。

注意：申请笔迹鉴定并不一定需要当事人双方都同意。

根据《中华人民共和国民事诉讼法》：

第七十六条当事人可以就查明事实的专门性问题向人民法院申请鉴定。当事人申请鉴定的，由双方当事人协商确定具备资格的鉴定人；协商不成的，由人民法院指定。

当事人未申请鉴定，人民法院对专门性问题认为需要鉴定的，应当委托具备资格的鉴定人进行鉴定。