二审并不一定可以申请笔迹鉴定，在民事诉讼中，根据《最高人民法院关于民事诉讼证据的若干规定》第二十五条规定，当事人申请鉴定，应当在举证期限内提出。如果在一审中没有申请笔迹鉴定的，二审法院按此规定应不予准许。

一、申请笔迹鉴定的程序是什么

如果没有明确结果的笔迹鉴定，法院不会采纳。根据《最高人民法院关于民事诉讼证据若干规定》的规定：第二十五条当事人申请鉴定，应当在举证期限以内提出。对需要鉴定事项负有举证责任的当事人，在人民法院指定的期限以内无正当理由不提出鉴定申请或者不预交鉴定费用或者拒不提供相关材料致使对案件争议的事实无法通过鉴定结论予以认定应当对该事实承担举证不能的法律后果。

申请笔迹鉴定的程序为：

1、由一方当事人在举证期限以内向法院提出书面申请；

2、经过双方当事人的质证，确定提供鉴定的样本；

3、由双方协商选定或摇号选定鉴定机构；协商不成的由法院指派鉴定结果；

4、鉴定机构接收后鉴定申诉后，凭借自己专业技术以及依法做出鉴定意见；

5、双方当事收到鉴定意见后对鉴定结论有异议的，还可以申请重新鉴定。

二、对方不配合鉴定怎么办

根据《最高人民法院关于适用的解释》第九十条，当事人对自己提出的诉讼请求所依据的事实或者反驳对方诉讼请求所依据的事实，应当提供证据加以证明，但法律另有规定的除外。在作出判决前，当事人未能提供证据或者证据不足以证明其事实主张的，由负有举证证明责任的当事人承担不利的后果。这是举证责任分配的基本原则。一方向法院依法申请司法鉴定，此鉴定必须对方配合才能完成，如笔迹鉴定，亲子鉴定等等，对方拒绝配合，会导致鉴定无法实施，无法认定需要通过鉴定确定的案件事实的结果。此时应当推定申请鉴定一方所主张的待鉴定案件事实成立。因为负有举证责任一方在向法院申请鉴定并得到法院准许时，已经完成举证义务，此时举证责任转移到应当配合鉴定的另一方，另一方只有配合鉴定才能完成其举证义务，其拒不配合鉴定，视为放弃举证，应当对案件事实的举证不能承担不利后果。即，可推定申请鉴定一方主张的案件事实成立。

三、对于笔迹鉴定结果不予认可应该怎么办

对于笔迹鉴定结果不予认可应该提出异议，再次申请，重新进行司法鉴定。

1、犯罪嫌疑人不承认笔迹可以继续司法鉴定，如果鉴定一致，可以认定有罪。

2、《最高人民法院关于民事诉讼证据的若干规定》第二十七条规定“当事人对人民法院委托的鉴定部门作出的鉴定结论有异议申请重新鉴定，提出证据证明存在下列情形之一的，人民法院应予准许：

(1)鉴定机构或者鉴定人员不具备相关的鉴定资格的；

(2)鉴定程序严重违法的；

(3)鉴定结论明显依据不足的；

(4)经过质证认定不能作为证据使用的其他情形。