抚养权调解书签字后不能再上诉。调解书经双方当事人签收后具有法律效力。如果当事人不服抚养权调解书中的内容，必须要提出证据证明调解违反自愿原则或者调解协议的内容违反法律，当事人就可以申请再审。经人民法院审查属实的，应当再审。

《中华人民共和国民法典》第一千零七十九条

夫妻一方要求离婚的，可以由有关组织进行调解或者直接向人民法院提起离婚诉讼。

人民法院审理离婚案件，应当进行调解；如果感情确已破裂，调解无效的，应当准予离婚。

第一千零八十条

完成离婚登记，或者离婚判决书、调解书生效，即解除婚姻关系。