大客车零晨2点到5点不能在高速公路上行驶，夜间在道路上（高速公路、混合道路）行驶的客运车辆凌晨2点至5点必须就近停靠在安全地带，落地休息，驾驶员要及时提醒车上旅客不要随意走动，照看好随身携带的物品，如有需求及时联系驾驶员等。

《道路旅客运输企业安全管理规范》第四十五条

道路旅客运输企业在安排运输任务时应当严格要求客运驾驶人在24小时内累计驾驶时间不得超过8小时（特殊情况下可延长2小时，但每月延长的总时间不超过36小时），连续驾驶时间不得超过4小时，每次停车休息时间不少于20分钟。

对于单程运行里程超过400公里（高速公路直达客运600公里）的客运车辆，企业应当配备两名以上客运驾驶人。对于超长线路运行的客运车辆，企业要积极探索接驳运输的方式，创造条件，保证客运驾驶人停车换人、落地休息。对于长途卧铺客车，企业要合理安排班次，尽量减少夜间运行时间。